Возможности жидкостной цитологии

Введение

Актуальность темы. Цитологическое исследование цервикальных мазков уже более 50-ти лет является наиболее распространенным, успешным и экономически эффективным методом диагностики заболеваний шейки матки. Цитологический скрининг с целью профилактики и ранней диагностики злокачественных новообразований данной локализации остается «золотым стандартом» в онкологии.
Эффективность цитологического метода во многом зависит от правильной организации преаналитического этапа работы: полноценности пунктата с достаточным количеством клеточного материала, своевременной фиксации, условий хранения и транспортировки, окраски, качества приготовления цитологических мазков, а также от квалификации цитолога, оценивающего адекватно приготовленные препараты. Стремление улучшить качество цитологической диагностики и уменьшить недостатки традиционного исследования привели к разработке новой технологии — метода жидкостной цитологии. Использование жидкостных технологий приготовления препаратов дает дополнительные возможности для транспортировки, длительного хранения и архивирования материала, стандартизации приготовления и окраски и применения уточняющих методов диагностики — все это облегчает работу цитолога, улучшая визуализацию клеточного материала.
Цитология шейки матки является наиболее эффективным и экономически выгодным методом скрининга рака шейки матки. Скрининг рака шейки матки проводится с использованием обычного мазка Папаниколау (ПАП-теста) уже более 30 лет. Несмотря на ограниченную точность теста, заболеваемость раком шейки матки существенно снизилась. Со временем для повышения точности был разработан метод жидкостной цитологии.
В настоящее время метод жидкостной цитологии (ЖЦ) приобретает все большее распространение и находит применение не только в гинекологической практике, но и в других областях. Новый подход к приготовлению и обработке цитологического материала с использованием ЖЦ расширяет возможности применения ИЦХ и молекулярно-генетических методов на цитологическом материале.
Впервые метод жидкостной цитологии был утвержден для использования в гинекологическом скрининге FDA США в 1996 г. для системы ThinPrep2000™ (Hologic Co., USA), а в 1999 году — для системы SurePath™ (TriPath, Becton Dickinson, USA). Параллельно метод стал применяться в цитологической диагностике опухолей.
В настоящее время традиционное цитологическое исследование ассо циируется с высоким уровнем ложноотрицательных и ложноположительных результатов (Петрова Г.В., 2003; Grace А. et al., 2002). Известно, что значи тельная часть больных инвазивным цервикальным раком имеет в анамнезе «негативные по клеточной атипигоцервикальные мазки (Baldauf J.J., 1997; Allen S.M. et al., 1998). Вместе с тем, если болезнь диагностируется в стадии инвазивного рака, только у половины женщин имеется шанс прожить 5 лет (Урманчеева А.Ф., 2001; Parker S.L. et al., 1998).
Сбор и обработка жидкого материала обеспечивают более репрезентативный отбор проб из шейки матки, чем обычное размазывание цервикально-влагалищного образца на стекле. Однако эти препараты на предметных стеклах LBC вносят изменения в цитоморфологию этих клеточных образцов по сравнению с традиционными обычными мазками.
Объект исследования – цитологические исследования.
Предмет исследования - цитологический метод жидкостной цитологии.
Цель работы – рассмотреть возможности жидкостной цитологии.
Задачи работы:
- рассмотреть историю разработки метода жидкостной цитологии;
- рассмотреть использование жидкостной цитологии и ее особенности;
- проанализировать значимость жидкостной цитологии для эндоскопического исследования тканей твердых образований поджелудочной железы;
- проанализировать преимущества использования жидкостной цитологии при злокачественном плевральном выпоте;
- рассмотреть жидкостную цитологию и компьютеризированный автоматический скрининг;
- проанализировать требования к жидкостной цитологии;
- рассмотреть системы и методы жидкостной цитологии Теоретической и методологической основой исследования послужили материалы отечественных и зарубежных авторов по теме работы, научные статьи в периодических изданиях, ресурсы информационной сети Интернет, а также учебные пособия, имеющие непосредственное отношение к предмету исследования.
















Глава 1. Жидкостная цитология

1. 1. История разработки метода жидкостной цитологии

Основы цитологического метода диагностики были заложены во второй половине XIX века, когда немецкий анатом Генрих Вильгельм Готфрид фон Вальдейер-Гарц в 1860-е годы предположил, что опухоли развиваются из одной клетки и переносятся по организму кровью и лимфой, а также впервые в мире предложил цитологические критерии диагностики новообразований.
Предпосылки к развитию отечественной цитологии появились еще в конце XIX века, когда А. С. Парцевский (с 1883 г.) и А. А. Богомолов (с 1900 г.) предприняли попытки цитологического исследования селезенки и печени, а А. И. Вильчур и П. А. Яппа провели первое цитологическое исследование пунктата легкого у больного туберкулезом. Однако говорить о масштабном развитии отечественной клинической цитологии на рубеже XIX и XX веков было еще рано.
«Первые данные о цитологическом малоинвазивном методе выявления злокачественных новообразований за рубежом были опубликованы патологом Георгиасом Николаосом (Джорджем) Папаниколау и доложены на конференции в Мичигане в 1928 г. Он предложил метод диагностики опухолей женской репродуктивной системы с помощью цитологического исследования препаратов отделяемого половых органов, окрашенных с использованием сложной комбинации красителей (лихтгрюн, бисмаркбраун, эозина, фосфорномолибденовой кислоты и карбоната лития)» .
Цитология шейки матки была введена Джорджем Папаниколау в клиническую практику в 1940 году. В 1945 году мазок Папаниколау получил одобрение Американского онкологического общества как эффективный метод профилактики рака шейки матки. Центр цитологии в Ванкувере, Британская Колумбия, опубликовал данные, которые подтвердили, что цитологический скрининг приводит к снижению частоты инвазивного рака шейки матки.
Парк и др. установили, что чувствительность обычных мазков Папаниколау для обнаружения предшественников рака шейки матки составляет менее 50%. Было выявлено несколько ограничений обычного мазка, включая неадекватный перенос клеток на предметное стекло, однородное распределение аномальных клеток, наличие затемняющей крови, воспаления или толстых участков перекрывающихся эпителиальных клеток.
Технология тонкого слоя на жидкой основе была разработана для решения проблемы ограничения мазка Папаниколау. Было исследовано более 5 000 000 субъектов, и большинство данных указывают на значительную пользу жидкостной тонкослойной технологии в обнаружении поражений-предшественников рака шейки матки и в улучшении адекватности образцов.
Благодаря трудам Н. Н. Шиллер-Волковой и ее сотрудников в 1964 г. цитологический метод начали использовать в Ленинградской области при массовых профилактических гинекологических осмотрах населения, а в 1968 г. была создана первая экспериментальная централизованная цитологическая лаборатория в городе Калинине (ныне – Тверь); к концу 1980 г. было организовано уже около трехсот таких лабораторий, а процент женщин, охваченных цитологическими исследованиями, к этому времени составил 43,3 %.
«Метод жидкостной цитологии, в том числе в технологии BD SurePath прочно входит в практику современных клинико-диагностических лабораторий, завоевав признание российских и зарубежных специалистов благодаря высоким стандартам качества» .
Разработки метода жидкостной цитологии велись еще с начала 90-х годов, основной целью было создание тонкослойного цитологического препарата, который бы значительным образом снизил количество неадекватных мазков и повысил чувствительность цитологического исследования.
Термин «жидкостное приготовление препаратов» (liquidbased preparation) был введен в 1998г., а первые препараты выполняли, используя только цитоцентрифуги. Окрашивались эти препараты только ручным способом по Папаниколау (Пап-тест). Традиционные Пап-тесты успешно использовались еще в середине 1940-х годов, тогда как первые препараты с использованием жидкостного метода приготовления был одобрен «Food and Drug Administration» в 1996 г.

1. 2. Использование жидкостной цитологии и ее особенности

О влиянии цитологического скрининга шейки матки свидетельствует неуклонное снижение показателей заболеваемости и смертности от инвазивного рака шейки матки в развитых странах за последние десятилетия/
В некоторых европейских странах, в частности в скандинавских странах, Великобритании и Нидерландах, были организованы программы скрининга населения. В других странах, таких как Франция и Соединенные Штаты, цитологический скрининг стал частью регулярной профилактической помощи, в первую очередь путем обучения и мотивации отдельных врачей и пациентов, при этом охват населения и частота тестирования варьируются от страны к стране. В каждой стране необходимо расширять участие женщин, особенно в старших возрастных группах, в обследовании шейки матки.
«Рак шейки матки во всем мире занимает второе место по заболеваемости после рака молочной железы, и примерно три четверти случаев приходится на развивающиеся страны. Рецидивы наблюдаются в значительном числе случаев, несмотря на достижения в области универсального скрининга, раннего выявления, хирургического лечения и лучевой терапии. Сообщается, что частота рецидивов составляет 1,5 процента для ранних небольших опухолей и 20-40 процентов для более поздних опухолей» .
Не менее важным при проведении скрининга шейки матки для каждой женщины является обеспечение максимальной точности используемого теста. В последние годы точность обычного мазка Папаниколау стала предметом пристального внимания. Недавний метаанализ точности обычного мазка Папаниколау показал, что частота ложноотрицательных результатов сильно различается. Исследования источников ложноотрицательных результатов показали, что большинство из них связано с ошибками отбора проб, то есть при просмотре не обнаружено аномальных клеток на смазанном слайде. Аномальные клетки также могут остаться незамеченными из-за плохого качества мазка.
В рекомендациях Национальной комплексной онкологической сети по наблюдению после лечения рака шейки матки рекомендуется проводить традиционное Пап-тест каждые три месяца в течение первых двух лет, каждые шесть месяцев в течение трех лет, а затем ежегодно. Традиционный метод мазка из шейки матки используется для скрининга рака шейки матки с 1940-х годов, но имеет высокий уровень ложноотрицательных результатов из-за ошибок отбора проб, присутствия затемняющих материалов, ошибок скрининга и интерпретации. Морфологические изменения, вызванные лучевой терапией, чрезвычайно затрудняют интерпретацию результатов обычного Пап-теста.
Жидкостная цитология (ЖЦ) имеет преимущества, заключающиеся в меньшем количестве неудовлетворительных мазков, более быстром и эффективном методе, более точной интерпретации, меньшем количестве затемняющих материалов, таких как кровь, слизь, воспалительные клетки в мазках, и использовании суспензии остаточных клеток для тестирования вируса папилломы человека (ВПЧ).
Исследования показывают, что существует высокий уровень удовлетворительных образцов у пациентов после лучевой терапии с использованием жидкостной цитологии. Цитология свода влагалища, проводимая с использованием цитощетки, оказалась более эффективной благодаря адекватному сбору образцов Жидкостная цитология была разработана для решения большинства этих проблем и, таким образом, уменьшения количества ложноположительных и ложноотрицательных результатов мазков.
Жидкостная цитология (ЖЦ) — новый метод подготовки образцов шейки матки для цитологического исследования. В отличие от обычного приготовления «мазка», он включает приготовление суспензии клеток из образца, что используется для создания тонкого слоя клеток на предметном стекле. Таким образом, новое вмешательство станет частью процесса скрининга населения с целью снижения заболеваемости инвазивным раком шейки матки.
Жидкостная цитология шейки матки была разработана для повышения диагностической надежности мазков по Папаниколау (Пап-мазок). Обычные мазки Папаниколау могут давать ложноотрицательные и ложноположительные результаты из-за неадекватного отбора проб и подготовки препаратов, а также ошибок в лабораторном обнаружении и интерпретации. «Однако при жидкостной цитологии клетки шейки матки промываются консервантами, чтобы можно было отделить кровь и другой потенциально затемняющий материал. Это также позволяет провести дополнительное тестирование образца, например, на вирус папилломы человека (ВПЧ)» .
В отличие от жидкостной цитологии, традиционная цитология требует от врача подготовки образца вручную. На матовой части предметного стекла правильно помечается имя пациента и любой другой идентификатор с