Гистохимические методы исследования

Введение
Долгое время для изучения химического состава клеток и тканей применяли только классические биохимические методы, основанные на суммарном определении химических веществ в измельченной ткани (гомогенате). Несмотря на свои положительные качества, эти методы не дали полного понимания локализации тех или иных химических веществ в различных структурных компонентах клеток и тканей. Поиски методов определения локализации химических веществ в целостных микроструктурах органов и тканей привели к созданию гистохимического метода, сочетающего гистологический и биохимический методы.
В ходе гистохимических реакций неорганические и органические вещества, входящие в состав клеток, вступают в химическую реакцию с различными реагентами (красителями) и образуют окрашенные продукты реакции. По степени интенсивности этих продуктов можно в какой-то мере судить о количественном содержании химического вещества в той или иной структуре.
Гистохимические методы широко используются в гистологии, цитологии, эмбриологии, патологической анатомии, экспериментальной и клинической морфологии. С помощью различных методов современной гистохимии можно оценить особенности функционирования различных тканей и клеточных структур, определить характер и скорость метаболических процессов в клетках и тканях, выявить ранние симптомы заболеваний.
Цель работы: рассмотреть гистохимические методы исследования.
Задачи: рассмотреть окрашивание липидов и липоидов (Судан III);
изучить окраску соединительной ткани по методу Маллори;
изучить окраску по методу Перлса;
рассмотреть количественные методы.
 
1. Цито- и гистохимические методы исследования. Методы микроскопического исследования
Цитохимические и гистохимические методы используются для выявления локализации в структурах клеток, тканей и органов различных веществ - ДНК, РНК, белков, углеводов, липидов, аминокислот, минеральных веществ, витаминов, активности ферментов. Эти методы основаны на специфике реакции химического реагента с субстратом, входящим в состав клеточных и тканевых структур, и на окрашивании продуктов химической реакции. Для повышения специфичности реакции часто используют ферментативный контроль: например, рибонуклеиновую кислоту (РНК) в клетках часто выявляют с помощью галлоцианина — красителя с основными свойствами, наличие РНК подтверждают контрольной обработкой рибонуклеазой, которая расщепляет РНК. Галлоцианин окрашивает РНК в сине-фиолетовый цвет. Если срез предварительно обработать рибонуклеазой, а затем окрасить галлоцианином, то отсутствие окрашивания подтвердит наличие в структуре рибонуклеиновой кислоты. Многие цитохимические и гистохимические методы описаны в специальных руководствах.
Гистохимические методы обнаружения ферментов обладают высокой специфичностью. Они основаны на действии фермента на определенный субстрат в присутствии другого вещества, называемого агентом захвата (акцептором). Соединяясь с первичным продуктом ферментативной реакции, акцептор образует нерастворимый, обычно окрашенный осадок — конечный продукт реакции, маркирующий место действия фермента. В качестве акцепторов используются ионы металлов, соли диазония и другие соединения. Ионы металлов имеют высокую электронную плотность, поэтому их можно обнаружить с помощью электронной микроскопии. Это свойство используется в электронной гистохимии. Для определения дегидрогеназ на срезе ткани используют соли тетразолия, которые в присутствии специфического субстрата восстанавливаются с образованием нерастворимых окрашенных продуктов – формазанов [4].