Дипломная работа по микробиологии на тему Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики сальмонеллезов

Введение

Актуальность темы исследования. Среди людей болезнь регистрируется в пять раз чаще, чем дизентерия. По оценке Референс-центра по мониторингу за сальмонеллезами, в 2017 году заболеваемость данной инфекцией, составившая 22,02 на 100 тыс. населения, являлась самой низкой за последние 10 лет. Согласно данным СевероЗападного государственного медицинского университета им. И. И. Мечникова, Минздрава России и НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера на 2019 год в России регистрируется около 50 тыс. случаев заболевания людей сальмонеллезом [24].
Сальмонеллез – это инфекционное заболевание пищеварительной системы, возникающее в результате заражения бактериями рода Salmonella, сопровождающееся выраженной интоксикацией и дегидратацией, иногда протекающее по типу тифа, либо с септицемией. Наиболее опасными в плане сальмонеллеза являются термически плохо обработанные яйца, молочные и мясные продукты. Течение сальмонеллеза может происходить по гастроинтестинальному или генерализованному варианту, возможно бактериовыделение без клинических проявлений. Диагноз сальмонеллеза выставляется при обнаружении сальмонелл в каловых и рвотных массах больного.
Сальмонеллы — возбудители энтероколитов или пищевой токсикоинфекции, а также генерализованного тифопаратифозного инфекционного процесса, протекающего с явлениями бактериемии и септицемии с метастазами и развитием осложнений, в том числе остеомиелитов. Свое наименование сальмонеллы получили в честь американского исследователя D. Salmon, который в 1885 г. описал микроорганизм, известный в настоящее время как Salmonella choleraesuis. Для сальмонеллезного инфекционного процесса характерно язвенное поражение лимфоидной системы тонкого кишечника. Полиморфноядерные лейкоциты в определенной мере препятствуют распространению возбудителя за пределы просвета кишечника и его лимфатических узлов и развитию генерализованной инфекции, в связи с чем сальмонеллезные энтероколиты часто протекают без бактериемии, и инфекционный процесс ограничивается в основном язвенным поражением лимфоидной системы тонкой кишки.
В отличие от шигеллезных энтероколитов, инфекционная доза при которых составляет примерно 100 микробных клеток шигелл, для возникновения сальмонеллезной пищевой токсикоинфекции требуется не менее 100 000 жизнеспособных клеток возбудителя. Salmonella typhi, Salmonella paratyphi А и Salmonella paratyphi В (возбудители брюшного тифа, паратифа А и В), в отличие от убиквитарных сальмонелл, вызывают клиническую картину типичной брюшнотифозной инфекции, характеризующуюся цикличностью. Возбудитель через ротовую полость попадает в пищеварительный тракт. В кишечнике развивается воспаление в солитарных фолликулах и пейеровых бляшках. В конце инкубационного периода бактерии из лимфатического аппарата кишечника попадают в кровь, развивается бактериемия. С кровью возбудитель попадает во внутренние органы (печень, селезенку), лимфатические узлы, костный мозг. При пищевой токсикоинфекции после инкубационного периода (примерно 6 ч или немного более), сальмонеллезные энтероколиты манифестируют тошнотой, рвотой, прогрессированием болей в кишечнике и профузной диареей, что связано с действием специфического энтеротоксина возбудителя.
Этиологическая лабораторная диагностика сальмонеллезов включает выделение культуры патогена, обнаружение АГ и ДНК сальмонелл, определение специфических АТ к АГ возбудителя.
Учитывая частоту применяемых методов исследования, была выдвинута гипотеза исследования - качество и быстрота выполнения лабораторных исследования улучшится при условии: правильной организации преаналитического и постаналитического этапов исследования, быстрота выполнения анализов.
Цель исследования – выполнить сравнительную характеристику методов лабораторной диагностики сальмонеллезов.
Задачи исследования:
1) изучить теоретические аспекты изучения методов лабораторной диагностики сальмонеллезов;
2) выполнить сравнительную характеристику методов лабораторной диагностики сальмонеллезов.
Объект исследования – диагностика сальмонеллеза.
Предмет исследования – методы лабораторной диагностики.
Методы исследования: изучение специализированной литературы, анализ, сравнение и анкетирование.
Практическая значимость работы состоит в ранней диагностике заболеваний вызванных сальмонеллами и методах исследований.
Структура работы: введение, две главы, заключение, глоссарий, список использованных источников и список сокращений. В тексте работы имеются 3 таблицы и 4 рисунков. Общий объём работы 39 страниц.



 
Глава 1. Теоретические аспекты изучения методов лабораторной диагностики сальмонеллезов

1.1. Сальмонеллез: описание и классификация

Сальмонеллёз — это острое инфекционное заболевание желудочно-кишечного тракта с возможностью дальнейшей генерализации процесса (распространением заболевания по всему организму). Причина развития сальмонеллёза — различные серотипы бактерий рода Salmonella. К клиническим характеристикам сальмонеллёза относят синдром общей инфекционной интоксикации, синдром поражения желудочно-кишечного тракта (гастрит, энтерит), синдром обезвоживания, гепатолиенальный синдром (увелечение печени и/или селезёнки) и иногда синдром экзантемы (высыпания) [23].
Возбудитель:
- царство — бактерии;
- семейство — кишечные бактерии (Enterobacteriaceae);
- род — Сальмонелла (Salmonella);
- триба — Esherichiae;
- вид — Enterica [15].
Существует 7 подвидов (более 2500 сероваров). Наиболее актуальные серовары: typhimurium, enteritidis, panama, london.
Представлены следующей антигенной структурой:
- О-антиген (соматический, термостабильный);
- H-антиген (жгутиковый, термолабильный);
- К-антиген (поверхностный, капсульный);
- Vi-антиген (антиген вирулентности — степень способности штамма вызвать заболевание; является компонентом О антигена);
- М-антиген (слизистый).
К факторам патогенности (механизмам приспособления бактерий) относятся:
- холероподобный энтротоксин — интенсивная секреция жидкости в просвет кишки;
- эндотоксин (липополисахарид) — общее проявление интоксикации;
- инвазия — заражение.
Тинкториальные свойства: разлагают глюкозу и маннит, образовывая кислоту и газ, продуцируют сероводород. Грамм-отрицательные палочки подвижны, спор и капсул не образуют. Растут на обычных питательных средах, образуя прозрачные колонии, на мясо-пептонном агаре с образованием колоний голубоватого цвета, на среде Эндо образуют прозрачные розовые колонии, на среде Плоскирева — бесцветные мутные, на висмут-сульфитном агаре — чёрные с металлическим блеском.
Высокоустойчивы во внешней среде (без агрессивных воздействий), активно размножаются в мясе и молоке (до 20 суток), в воде сохраняют жизнесособность до 5 мес., в почве — до 9 мес., в комнатной пыли — до 6 мес., в колбасе — до 1 мес., в яйцах — до 3 мес., в фекалиях сохраняются до 4 лет. При 56 °C погибают через 3 минуты, при кипячении мгновенно. Сальмонеллы, которые находятся в куске мяса массой 400 гр и толщиной до 9 см, погибают при его варке за 3,5 часа. Соление и копчение оставляет сальмонелл в живых. Воздействие кислот и хлорсодержащих дезинфицирующих средств вызывает их гибель. В последнее десятилетие появились штаммы сальмонелл, устойчивые ко многим антимикробным препаратам.
Проанализируем патогенез. Сальмонеллы, попавшие в организм, обитают не только в просвете кишечника, они внедряются в энтероциты (клетки эпителия слизистой оболочки тонкой кишки), передвигаясь от щеточной каймы эпителиальных клеток к основанию в лизосомных вакуолях. Существенных морфологических повреждений клеток при этом не наблюдается. Не отвергается также возможность проникновения сальмонелл через межклеточные пространства эпителиального слоя. Всасывание продуктов жизнедеятельности и распада сальмонелл наступает лишь после изменения проницаемости кишечного барьера в результате внедрения сальмонелл в энтероциты и воздействия на них ферментов, образуемых сальмонеллами,— декарбоксилаз, протеаз, муциназ и др.
При попадании в собственный слой, или собственную пластинку, слизистой оболочки тонкой кишки сальмонеллы захватываются нейтрофилами и макрофагами, размножаются в них и гибнут, но в отдельных случаях могут длительно сохраняться. При гибели фагоцитов освобождаются медиаторы воспаления — кинины, гистамин, серотонины и др. По лимфатическим путям сальмонеллы попадают в брыжеечные лимф, узлы, при генерализации процесса проникают в кровь и у некоторых больных размножаются в различных внутренних органах. У больных отмечается также снижение бактерицидной активности сыворотки крови, дефицит IgM, нарушение нормального соотношения Т- и В-лимфоцитов и макрофагов.
Токсины сальмонелл и избыточное количество образующихся биологически активных веществ приводят к нарушению функционально-адаптивных механизмов и обменных процессов на молекулярном, клеточном и органном уровнях [22].
При контакте токсинов сальмонелл с энтероцитами происходят сложные молекулярные изменения в мембранных структурах энтероцитов, приводящие, в конечном счете, к диарее. В первые часы болезни нарастает внутриклеточная концентрация циклического 3,5-аденозинмонофосфата, простагландинов, фосфолипидов, а количество гуано-зинмонофосфата снижается, что ведет к нарушению проницаемости клеточных мембран и способствует развитию интоксикации, диареи, обезвоживания и других симптомов. По-видимому, живой возбудитель и его токсины играют роль пускового механизма в сложном патогенезе сальмонеллеза. В последующем доминирующее значение в развитии клин, проявлений приобретают расстройства функций пищеварительной, сердечно-сосудистой, нервной систем.
В результате нарушения проницаемости сосудов в просвет кишечника поступает большое количество воды и солей, что приводит к нарушению водно-электролитного баланса [22].
При генерализованной форме С. размножение и накопление сальмонелл происходит во внутренних органах, что сопровождается длительной лихорадкой, увеличением печени и селезенки с образованием гнойных очагов.
Выделяют четыре формы течения сальмонеллёза: гастроинтестинальную, генерализованную, субклиническую, бактерионосительство.
Гастроинтестинальная форма (быстрое повышение температуры тела до 39 °С, сопровождаемое чувством интоксикации, слабостью, головокружением, тошнотой и рвотой, болями в животе, далее развитие диареи).
Генерализованные формы: тифоподобная и септическая.
Тифоподобная — на фоне синдрома общей инфекционной интоксикации появляются кишечные расстройства, далее через 1-2 дня они стихают, и на первый план выходят лихорадка и интоксикация. Лихорадка волнообразная, постоянного или неправильного типа, длительностью до 14 суток. Для этого вида сальмонеллёза характерны выраженные изменения со стороны ЦНС (центральной нервной системы) — вялость, оглушённость, заторможенность. Лицо больного бледное, возможны высыпания на теле, увеличение печени и селезёнки, отпечатки зубов на языке. В гемограмме вначале нейтрофильный лейкоцитоз, впоследствии сменяющийся лейкопенией — снижением лейкоцитов в крови (такие показатели сохраняются до трёх недель).
Септическая — вначале схожа с тифоподобной формой, затем состояния резко ухудшается [17]. Лихорадка неправильного типа с очень большими колебаниями в течение суток, которая сопровождается резкой слабостью, потливостью, в различных органах формируются гнойные очаги, т. е. заболевание вызывает мультиорганное поражение. Сальмонеллёз этой формы без лечения и при антибиотикоустойчивости бактерий может привести к летальному исходу. Обращает внимание восковидная бледность и мраморность кожи, лёгкое пожелтение слизистых оболочек, акроцианоз. Отмечается тахипноэ (учащённое поверхностное дыхание), тахикардия. Резко выражен гепатолиенальный синдром (увеличение печени и селезёнки). Возможны тромбогеморрагические проявления.
Субклиническая форма — симптомы предшествия болезни (слабость, незначительный дискомфорт в животе или вообще отсутствуют проявления) и положительные серологические и бактериологические результаты анализов.
Бактерионосительство (отсутствует клиническая составляющая, изменения наблюдаются только при бактериологическом и серологическом исследованиях):
- острое (у выздоравливающего человека после манифестных форм выделение возбудителя происходит в течениё трёх месяцев);
- хроническое (выделение сальмонелл более трёх месяцев — показано наблюдение не менее шести месяцев с повторными бактериологическими исследованиями кала, мочи, содержимого просвета двенадцатиперстной кишки;
- транзиторное (отсутствие клинических проявлений в момент обследования и в предыдущие три месяца, отсутствие изменений в гемограмме, отрицательные серологические реакции в динамике, но положительные бактериологические анализы в течение 1-2 раз с интервалом в один день при последующих отрицательных результатах [23].
Клиническая картина. Инкубационный период колеблется от нескольких часов до 2—3 суток, чаще около 24 час. При гастроинтестинальной форме Сальмонеллёза в клин, картине доминируют диспептпческие симптомы, интоксикация, лихорадка. Заболевание в большинстве случаев начинается остро. Ему предшествует кратковременное (30—60 мин.) чувство дискомфорта (тяжесть в эпигастральной области, тошнота и др.) и слабость. Возникают рвота, схваткообразные боли в животе, понос, озноб, повышается температура тела, нарастает эксикоз.