Современные методы диагностики: ИФА и ПЦР

Введение

Целью курсовой работы является изучение современных методов ди-агностики ИФА и ПЦР.
В соответствии с поставленной целью необходимо решить ряд задач, таких как:
 рассмотреть сущность метода ИФА;
 раскрыть показания для применения метода ИФА, достоинства и недостатки, причины ложноположительных и ложноотрицательных ре-зультатов;
 охарактеризовать сущность метода ПЦР;
 изложить показания для применения метода ПЦР, достоинства и недостатки, причины ложноположительных и ложноотрицательных ре-зультатов.
Объектом исследования являются методы диагностики ИФА и ПЦР, предметом – особенности их применения.


1 Теоретические аспекты диагностики методом ИФА

1.1 Сущность метода ИФА, показания для применения
Иммуноферментный анализ является лабораторным иммунологиче-ским методом количественного или качественного определения разных макромолекул, соединений, вирусов и др., в основе которого находится особая реакция «антиген-антитело». Иммуноферментный анализ включает в себя ряд последовательных этапов, а сам итог может быть оценен по оп-тической плотности или визуально [3, 9].
Процесс проведения иммуноферментного анализа может быть разде-лен на три ключевые стадии: иммунохимический процесс - формирование комплекса антиген-антитело (АГ-АТ), присоединение к нему метки и ее ви-зуализацию. Суть ИФА состоит в специализированном взаимодействии ан-тигена и антитела с последующим присоединением к полученному ком-плексу коньюгата (антивидового иммуноглобулина, который помечен ферментом). Фермент вызывает разложение хромогенного субстрата с об-разованием окрашенного продукта, который выявляется или фотометри-чески, или визуально. Регистрацию итогов реакции проводят на специали-зированных фотометрах с вертикальным лучом при определенной длине волны. Итог выражают в единицах оптической плотности [1, 4].
Среди лабораторных методов ИФА находит обширное применение в здравоохранении, разных сферах промышленной биотехнологии, сельско-го хозяйства, научно-исследовательской сфере и природоохранной дея-тельности [2, 11, 12].
Эпидемиологические обследования, диспансеризация населения, вы-явление отравлений, наличия наркотиков в крови, вирусные заболевания растений, определение содержания лекарственных соединений в тканях, определение витаминов, антибиотиков и иных биологически активных со-единений при отборе активных штаммов-продуцентов в промышленной биотехнологии, контроль за качеством медицинских препаратов из донор-ской крови на отсутствие вирусов-возбудителей СПИДа и гепатита В - это только небольшой перечень практического применения иммунофермент-ного анализа [7].
При диагностике инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ имеет максимальную информативность. Плюсами данного метода являются возможность ранней диагностики инфекции, возможность про-слеживания динамики развития процесса, удобство и быстрота в работе как экспресс тест. Исследования, которые выполняются для обнаружения антигенов возбудителя и специфических антител к ним при инфекциях, яв-ляются доступными методами лабораторной диагностики. ИФА применя-ют для диагностики бактериальных, вирусных, паразитарных и грибковых инфекций. Метод является незаменимым и при диагностике вирусных за-болеваний, где осложнены прямые методы детекции возбудителя. Помимо этого, в ряде ситуаций серологические исследования остаются единствен-ным методом скрининговой диагностики инфекций, к примеру, токсокаро-за, токсоплазмоза, трихинеллеза [6, 8, 10]. ИФА является также одним из наиболее надежных современных методов лабораторной диагностики ВИЧ-инфекций, сифилиса, вирусных гепатитов [5].
Иммуноферментный анализ применяется в двух направлениях: обна-ружение с диагностической целью антител в сыворотке крови обследуемо-го и определение антигенов возбудителя для установления его видовой или родовой принадлежности. Учитывая динамику синтеза отдельных классов иммуноглобулинов в иммунном ответе, наличие антител класса ^М гово-рит о первичной острой инфекции, в то время как обнаружение только IgG маркирует давний процесс или наличие иммунологической памяти без ак-тивного заболевания. Кроме того, к IgG относятся поствакцинальные анти-тела. Определение специфических ^А информативно для последующего контроля излеченности заболевания, т.к. ^А, имея короткий период полу-распада, исчезают из циркуляции после успешного лечения в течение двух недель. Авидность антител класса IgG позволяет судить о давности инфи-цирования, что в особенности важно при скрининге беременных женщин на внутриутробные инфекции.
Исходя из сказанного выше, иммуноферментный метод представляет собой один из самых специфичных, чувствительных, воспроизводимых, общедоступных и клинически-информативных методов лабораторного ис-следования. Грамотное применение данного метода позволяет значительно расширить диагностические возможности медицинских лабораторий.