Разработка технологии производства биоаналога нецитумумаба производительностью 55 кг в год

Введение

Рак легкого (РЛ) остается одним из самых распространенных злокачественных новообразований в мире, характеризующихся высокими показателями заболеваемости и смертности. По данным Национального института рака США (National Cancer Institute, NCI) в 2015 г. диагноз РЛ будет установлен у 221200 пациентов, из которых около 158040 больных умрут от данного заболевания. Отсутствие симптомов на ранних стадиях болезни и онкологической настороженности у населения приводит к диагностике у большинства больных метастатического процесса.
В последние годы отмечается значительный прогресс в лечении метастатической формы немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ), связанный с выявлением мутации в структуре гена рецептора эпидермального фактора роста (EGFR). Появление таких ингибиторов тирозинкиназ 1-го поколения, как эрлотиниб, гефитиниб, афатиниб, стало значимым событием в истории лечения этой патологии, но, к сожалению, данный успех не распространяется на терапию пациентов с метастатическим плоскоклеточным НМРЛ. До сих пор он остается одной из наиболее трудных для лечения форм заболевания, для терапии которой существует ограниченный выбор средств. Показатель пятилетней выживаемости удается достигнуть лишь у 5% больных с данной патологией. До сегодняшнего дня не существовало эффективных средств первой линии терапии этого тяжелого заболевания.
Нецитумумаб (Necitumumab), также известный как Портразза (Portrazza), – препарат американской фармацевтической компании Eli Lilly, представляет собой рекомбинантное человеческое моноклональное антитело иммуноглобулина класса G (IgG1). Действие нецитумумаба направлено на блокаду внеклеточного лиганд-связывающего домена EGFR. Активация EGFR тесным образом связана с прогрессированием опухолевого процесса, индукцией опухолевого ангиогенеза и ингибированием запрограммированной гибели клеток – апоптозом.
24 ноября 2015 г. Управлением по контролю над качеством пищевых продуктов и лекарственных средств США (FDA) был одобрен препарат нецитумумаб (Portrazza) для лечения больных метастатическим плоскоклеточным НМРЛ. Препарат зарегистрирован в комбинации с гемцитабином и цисплатином в качестве первой линии терапии данного заболевания. Одобрение FDA нецитумумаба основано на результатах открытого рандомизированного мультицентрового исследования 3 фазы SQUIRE, в котором приняли участие 1093 пациента с метастатическим плоскоклеточным НМРЛ, не получавшие ранее специфического лечения по поводу метастатического процесса.
Доказанная эффективность применения нецитумумаба в комбинации с гемцитабином и цисплатином в первой линии терапии метастатического плоскоклеточного НМРЛ открывает новые возможности как перед пациентами, так и перед врачами. Тем не менее, пользоваться ими нужно крайне осторожно и умело в связи с риском развития ряда серьезных побочных эффектов, описанных выше.
Таким образом разработка технологии производства биоаналога нецитумумаба является актуальной и востребованной темой на сегодняшний день.
 
1. Обзор литературы
Моноклональные антитела, предназначенные для использования при очистке других продуктов, должны быть показаны чистыми и свободными от посторонних агентов с помощью описанных методов.
Моноклональные антитела - это антитела с определенной специфичностью, полученные из клонированных клеток или организмы. Они могут быть получены из иммортализованных В-лимфоцитов, которые клонируются и размножаются в виде непрерывных клеточных линий (мышиные и человеческие моноклональные антитела) или из рДНК-модифицированных клеточных линий млекопитающих или бактерий (модифицированные моноклональные антитела). Важные соображения для клинического применения моноклональных антител включают возможную непреднамеренную иммунологическую перекрестную реактивность антитела с антигенами тканей человека, отличными от желаемых, и возможное присутствие вирусов в продуктах.
1.1 Моноклональные антитела мышиного происхождения
Мышиные моноклональные антитела получают из мышиных гибридом, полученных путем слияния. В-лимфоциты от иммунизированных мышей или крыс с клетками мышиной миеломы.
Общей проблемой терапевтического применения мышиных моноклональных антител у человека является возможная индукция антител у реципиента против мышиного иммуноглобулина (человеческое антитело против мыши или реакция HAMA). Это может привести к побочным реакциям и ограничить продолжительность эффективной терапии антителами. Кроме того, период полураспада мышей in vivo моноклональные антитела относительно короткие. Может быть разумным свести к минимуму нагрузку мышиного белка, вводимую пациенту, с помощью родительских линий клеток миеломы, которые сами по себе не синтезируют цепи иммуноглобулинов.
1.2 Моноклональные антитела человека
Преимущества человеческих моноклональных антител перед мышиными моноклональными антителами заключаются в том, что у людей-реципиентов с меньшей вероятностью развиваются антитела против них (хотя антиидиотипические и, возможно, антиаллотипические антитела все еще могут вырабатываться) и что человеческие антитела, вероятно, будут обладать полным спектром биологических функций, таких как функции Fc- области, которые могут быть специфичными для вида. Могут быть и другие преимущества, такие как выбор подкласса антител с определенными свойствами.
Мышиные моноклональные антитела почти всегда получают с использованием клеточных линий (гибридом) изготовлен путем слияния лимфоцитов иммунизированного донора с клетками миеломы. Это не относится к человеческим моноклональным антителам, поскольку, несмотря на обнадеживающие ранние сообщения, до сих пор нет действительно удовлетворительного партнера для слияния миеломы человека. В результате возникла серьезная трудность с получением человеческих моноклональных антител было получено поколение гибридомных линий приемлемой стабильности. Также во многих случаях трудно получить антиген-праймериз лимфоциты, пригодные для слияния. В связи с этим был разработан ряд альтернативных стратегий получения человеческих моноклональных антител. Это:
а) Слияние лимфоцитов человека (обычно периферической крови или лимфатических узлов) с мышиной миеломой или гибридной линией миеломы человека и мыши. Эта процедура заключается в по существу аналогичен методу гибридомы, используемому для получения мышиных моноклональных антител, но представляет некоторые технические проблемы, поскольку обычно обнаруживается более низкая эффективность слияния и предпочтительно теряются хромосомы человека. Эта процедура может рассматриваться как компромисс из-за отсутствия подходящего партнера для слияния миеломы человека.
б) Трансформация лимфоцитов человека